RNA Dot blot 实验流程核糖核酸

1、将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）
2、短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。
【RNA Dot blot 实验流程】3、用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。
4、取2μl RNA样品按顺序滴在NC膜上，注意枪头不要碰膜，样品应在膜上自然扩散，每次加样都需要更换枪头。
5、室温下静置带NC膜稍晾干后，转到37℃烘箱孵育30min
6、加入适量TBST清洗膜5min ，洗去未结合的RNA
7、弃去TBST ，加入适量封闭液，室温摇动孵育1小时。
8、弃去封闭液，加入TBST稀释好的一抗， 4℃孵育过夜。
9、回收一抗，然后TBST洗涤膜3次，每次5min 。
10、弃掉TBST ，加入适量TBST稀释的二抗室温孵育1小时。
11、弃掉二抗，然后TBST洗涤膜3次，每次5min 。
12、ECL底物孵育2min ，然后用ELC化学发光仪拍照
13、拍完照后，将膜放置于亚甲蓝染色缓冲液中，室温摇动孵育30min
14、用蒸馏水清洗至背景干净，约60s
15、仪器拍照。

RNA Dot blot 实验流程

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