分子生物学总结完整版( 四 ) _基因

线粒体，叶绿体
独立的蛋白质合成系统
肽链延长过程
1.进位(positioning)/注册(registration)：根据mRNA下一组遗传密码指导，使相应氨基酰-tRNA进入核蛋白体A位。通过延伸因子EF-Ts再生GTP形成EF-Tu?GTP复合物重新参与下一轮循环。需要消耗GTP ，并需EF-Tu、EF-Ts两种延伸因子
2. 成肽(peptide bond formation)：是由转肽酶（transpeptidase）催化的肽键形成过程
3. 转位(translocation)：核糖体向mRNA3’端方向移动一个密码子。需要消耗GTP ，并需EF-G延伸因子
真核生物肽链合成的延长过程与原核基本相似，但有不同的反应体系和延长因子。
另外，真核细胞核蛋白体没有E位，转位时卸载的tRNA直接从P位脱落。
蛋白质合成后的加工修饰有哪些内容
翻译后加工

一级结构的修饰:
N-端Met(fMet)去除二硫键的形成
个别氨基酸的修饰	羟化作用:羟脯氨酸羟赖氨酸酶活性中心的磷酸化
多蛋白的加工	一条合成后的多肽链经加工产生多种不同活性的蛋白质/多肽

高级结构的修饰:

亚基的聚合	HbA亚单位聚合
结合蛋白质的合成	糖蛋白的合成
辅基连接	辅基(辅酶)与肽链的结合

蛋白转运的2种机制：翻译中转运 (cotranslational transport)：蛋白质合成与跨膜运送是同时进行的。
翻译后转运(posttranslational transport) ：蛋白质在核糖体上合成后释放到胞质中。当它们跨膜运
送时，合成过程已完成，故称为“转译后运送”
第六章分子生物学研究法
限制性核酸内切酶：( RE)是一类核酸内切酶，能识别双链DNA分子内部的特异序列并裂解磷酸二酯键。
载体：指基因工程中携带外源基因进入受体细胞的运载工具，其本质是DNA复制子。
核酸分子杂交：在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex)
Southern杂交：即将DNA经限制性酶切，凝胶电泳后，再转移至膜上与标记探针杂交的一种核酸分子杂交技术。特异性，敏感性，准确性具佳。主要用于检测基因组中特定的基因和序列，也常用于鉴定克隆DNA的特殊序列。
Northern杂交：:即将电泳分离后的变性RNA吸印到适当的膜上再进行分子杂交的技术。
重组DNA技术中常用的工具酶：限制性核酸内切酶、DNA聚合酶Ⅰ、逆转录酶、T4DNA连接酶、碱性磷酸酶、末端转移酶、Taq DNA聚合酶。
重组DNA技术中常用的载体：载体按功能分为
克隆载体：为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。质粒、噬菌体、柯斯质粒载体（又称黏粒载体）、酵母人工染色体、细菌人工染色体、动物病毒DNA改造的载体（如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）
表达载体：为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体称为表达载体。根据宿主细胞分为：原核表达载体、真核表达载体。
PCR的反应体系：模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+ 。
PCR的原理：针对目的DNA的5￠-和3￠-端，设计一对特异引物，在每条引物的5￠-端分别加上不同的RE位点，然后以目的DNA为模板，经PCR 扩增便可得到带有引物序列的目的DNA ，再用相应RE切割PCR产物，产生黏端，随后便可与带有相同黏端的线性化载体进行有效连接。
PCR的用途：（一）目的基因的克隆（二）基因突变（三）DNA和RNA的微量分析（四）DNA序列测定（五）基因突变分析
第七章原核基因表达调控
操纵子：在原核生物中受同一蛋白质调控的一个转录功能单位，由启动子（ promoter ）、操纵基因（operator）和结构基因（structural gene)组成。
结构基因：编码蛋白质或RNA的基因。
调节基因：产生调控蛋白，调控结构基因表达的基因。
弱化子：指原核生物操纵子中，能显著减弱或终止转录作用的一段核苷酸序列。
转录因子：包括转录激活因子和转录阻遏因子。这类调节蛋白能识别并结合转录起始位点的上游序列或远端增强子元件，通过DNA—蛋白质相互作用。