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【维真生物】提供现货产品、载体构建、病毒包装、细胞系建立等服务
一、产品概述：
产品名称: PLM-Puromycin 试剂 产品货号：FH880802
规格：100μl（标准规格） 浓度：1ug/ul
推荐使用浓度：1-10 μg/ml
二、产品原理：
PLM-Puromycin试剂是
一种由链霉菌中获取的氨基糖苷类抗生素 ， 具有与tRNA分子3’末端类似的结构 ， 可以和核糖体的A位点结合 ， 从而抑制蛋白质合成对革兰氏阳性菌产生抑制作用 。 可用作筛选含该抗生素的基因质粒 ， 细胞株构建 ， 也可当做抗菌类抗生素使用 。
三、储存：
保存条件： -20℃或4
℃避光保存 ， 尽量避免反复冻融 。
运输条件：4℃以下低温运输
四、使用说明：
以验证目的质粒是否具有Puromycin 抗性为例说明本试剂的应用：
1. 转染前一天铺HEK293细胞 ， 培养基为含10% FBS 的DMEM培养基 ， 以6 well plate为例 ， 细胞数目约为0.5x106 cells 。
2. 在无菌管中加入目的DNA质粒（1-2 ug）及无血清的DMEM或者Opti-MEM 。
3.在无菌管中加入无血清的DMEM或者Opti-MEM及本公司VGF转染试剂4 -10 ug 。
4.将2和3步中的溶液混合 ， 室温放置20-30min 。
5.将4步所得混合液逐滴加入至6 well plate中 。
6.转染48h后 ， 吸弃完全培养基 ， 加入终浓度为1-10 ug/mlPLM-Puromycin试剂的完全培养基2ml 。
7．再培养48h后 ， 观察细胞状态 ， 不含嘌呤霉素的细胞会飘起死亡 ， 转入含嘌呤霉素抗性质粒的细胞则贴壁生长 。 再次吸弃完全培养基 ， 加入终浓度为1-10 ug/mlPLM-Puromycin试剂的完全培养基2ml ， 继续杀死无嘌呤霉素抗性的细胞 。
8.再培养48h ， 若细胞仍然贴壁生长且几乎长满 ， 结果说明我们的目的质粒含有嘌呤霉素抗性基因 ， 否则目的质粒不含嘌呤霉素抗性基因 。
注意事项：筛选细胞时 ， 细胞接种密度不能过大 ， 以免影响筛选效率 。 当细胞密度比较大时 ， 可加本试剂反复筛选 ， 直至对照细胞完全死亡
。 建议的一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1-10 μg/ml,使用前要做浓度筛选 ， 选择最佳浓度 。
【细胞系|知识分享：PLM-Puromycin试剂说明书】声明：本试剂仅供于我公司的产品搭配使用 ， 和其他公司产品搭配使用所产生的一切后果均与我公司无关 ， 本产品的最终解释权归我公司所有 。
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